Nasce a West Pembroke, Maine, il 27 febbraio 1899, ma studia e si laurea in medicina a Toronto dove viene presentato al Benting che sta conducendo le sue ricerche sul pancreas. Tra i due si instaura un rapporto di collaborazione che porta ad indi viduare ed isolare due lotti di insulina dei quali studiano effetti, modalità di somministrazione e dosaggi. I risultati di questa ricerca vengono presentati nel novembre 1921 all’Università di Toronto. Nel 1922 nei laboratori MacLeod il Best isola e purifica l’ormone dell’insulina la cui prima dose viene somministrata ad un paziente dell’Ospedale Generale di Toronto nello stesso anno. Ancora a Toronto, nel 1929 a Charles Best, ormai celebre, viene affidata la cattedra di fisiologia.